空质粒和酶切后的质粒哪个跑的快？

一、空质粒和酶切后的质粒哪个跑的快？

这个问题涉及到：质粒的构象；限制性核酸内切酶；质粒有三种构象：超螺旋、环状和线性，在电场中，超螺旋构象的质粒移动最快；限制酶会将双螺旋断开，即破坏了质粒的超螺旋结构，当你的双酶切位点离的比较近时，会出现酶切后的质粒反而比超螺旋质粒跑得慢的现象。

二、为什么进行质粒的酶切？

双酶切就是为了验证是否有目的基因，如果双酶切条带正确，而且PCR也没有问题，就可以确定质粒构建成功。

质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段(<10kb)且结构简单,质粒要比其它任何载体都要好。

在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的，先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段, 然后体外使两者相连接, 再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中, 如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。

通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化限制在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。

三、酶切质粒时，怎样鉴定质粒是否被切开了？

根据说明书，确定酶切条件，温度，时间 一般是2到3个小时，或者难切一点的过夜 完后加入loadingbuffer，跑琼脂糖凝胶电泳， 一般分以下几个孔， marker ，原始质粒， 一个酶单切，另一个单切， 两个酶双切 单切的两个条带一样大小，但是比原始质粒跑的慢 双切的如果有连入片段，就会是两条带，一小一大 如果没有连入片段，应该跟单切位置差不多大

四、PCR产物和质粒双酶切后电泳如何判断酶切完成？

提出来的质粒进行电泳实验。

提出来的质粒酶切后跑电泳。

有些时候，长出来的菌落不好说里面有没有质粒或者有什么质粒，特别是这种菌落长得不多的时候。至少在PCR之前可以进行1和2检测有没有质粒以及有没有插入片段。

五、菌落pcr正确，但是质粒酶切验证失败为啥？

双酶切不成功 怎么知道质粒大小正确?菌落PCR只能说明你PCR的目的片段在载体上 不能说明这个载体没问题双酶切不成功要不就是酶有问题 如果排除酶的问题 可能是你的载体突变了最好有原始的质粒 换一批感受态重新转染抽质粒

六、质粒酶切的纯化方式会影响连接吗？

需要，被切掉的部分同样带有粘性末端（因为粘性末端的碱基互补），会干扰目的片段与载体连接。

七、如何选取合适的内切酶进行质粒的验证？

一般选取无酶切位点和单一切点的几个酶进行单酶切和双酶切，电泳分析酶切产物大小进行验证

八、双酶切质粒后两条带分别是什么？

质粒的话,双酶切中间有几十bp以上,切出来的条带就是两条,这个你应该能判断的.

如果是pcr产物酶切出现了两条极近的带,那么很有可能是因为pcr产物纯化时有杂带污染,一开始跑胶的时候看不出来,后来你回收浓缩再加上酶切,再跑电泳的时候就出现了两条极近的带.

其实将这两条带回收（上面那条是目的条带的可能性要大些）,进行连接,只要操作和实验条件好的话,菌落的阳性率也挺高的,因为是双酶切连接.

九、基因工程中，为什么切质粒和切目的基因要用同种限制酶？

使用方法同种酶，为了使质粒和目的基因的切口形成相同（或者说互补也可以）的碱基序列，才能让目的基因嵌入质粒中

十、网站的编辑模式?

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